Key points are not available for this paper at this time.
باستخدام التطور الموجه، تم تصميم إنزيمات الحمض الأسي الأميني-tRNA (aaRSs) لتضمين العديد من الأحماض الأمينية غير التقليدية (ncAAs). حتى الآن، كان اختيار مثل هذه الطفرات الجديدة من aaRS يعتمد على التعبير عن بروتين رصدي قابل للاختيار. ومع ذلك، فإن هذه الاختيارات المعتمدة على الترجمة غير متوافقة مع المونومرات الغريبة التي تعتبر ركيزات دون المستوى الأمثل للريبوسوم. هناك حاجة إلى حل ذو خطوتين للتغلب على هذا القيد: (أ) تصميم aaRS لشحن المونومر الغريب، بدون ترجمة ريبوسومية؛ (ب) الهندسة اللاحقة للريبوسوم لقبول acyl-tRNA الناتج للترجمة. هنا، نبلغ عن منصة لهندسة aaRS التي تختار بشكل مباشر acylation-tRNA بدون ترجمة ريبوسومية (START). في START، يتم ربط كل طفر مختلف من aaRS بtRNA المناسب الذي يحتوي على شريط باركود فريد. تحمي acylation من طفر aaRS النشط الترانسفر الرنا المحتوي على الباركود المقابل من المعالجة المؤكسدة المصممة لإتلاف النهاية 3′-من الفترات غير المشحونة من الترانسفر الرنا. ثم يتم استخدام تسلسل هذه الترانسفر الرنا الباقية المحتوية على الباركود لكشف هوية الطفرات من aaRS التي أطلق acylated التسلسلات الترانسفر الرنا المقابلة. تم إثبات فعالية START من خلال تحديد طفرات جديدة من ميثانو ميثيل فيليوس الألوي pyrrolysyl-tRNA synthetase من مكتبة نايف التي تتيح دمج ncAAs في البروتينات في خلايا حية.
درس سوني وآخرون (Mon,) هذا السؤال.