تحديد آلية نقل aquaporin-2 المنظمة بواسطة الفازوبريسين باستخدام بروتيوميات التأشير بالتقارب

يتحكم الفازوبريسين في نفاذية الماء لأنابيب التجميع جزئياً عن طريق تنظيم نقل aquaporin-2 إلى ومن غشاء البلازما القمي في الخلايا الرئيسية. أظهرت الأدلة أن aquaporin-2 يتواجد في أجسام نهائية معاد تدويرها إيجابية Rab11 حيث يتم فسفرة محدد PDZ الخاص بها عند السيرين 269، مما يؤدي إلى تموضع aquaporin-2 القمي استجابة للفازوبريسين. في هذه الدراسة، استخدمنا ليغاز البيوتين المرتبط بـ Rab11 (TurboID) لبيوتينلة البروتينات المناخية وآليات النقل التي تُستدعى إلى الأجسام النهائية الإيجابية Rab11 في خلايا mpkCCD استجابة للفازوبريسين مقارنةً بالجهاز. تم تنقية البروتينات الموسومة بالبيوتين باستخدام كروماتوغرافيا ارتباط الستربتافيدين وتحديدها بواسطة مطيافية الكتلة للبروتينات. تم تحديد إجمالي 2948 بروتيناً في ثلاث تكرارات مستقلة، حيث أظهرت 119 بروتيناً زيادة في الأجسام النهائية الإيجابية Rab11 استجابة للفازوبريسين، بينما أظهرت 104 بروتينات انخفاضاً. أظهر تحليل مصطلحات GO للبروتينات الـ119 التي زادت عمليات بيولوجية غنية تشمل النقل، نقل البروتين، والنقل المُعتمد على الحويصلات. تميزت كيناز تنظيم ارتباط الأنابيب الدقيقة 2 من تحليل احتمالية قاعدة بايز كمرشح لكيناز فسفرة السيرين 269 في aquaporin-2. قامت الكيناز المنقى بتنشيط فسفرة ببتيد اصطناعي من aquaporin-2 عند السيرين 269 in vitro. من البروتينات الـ119 أيضاً بروتين فعال لـRho GTPase-تنشيط المجال PDZ 21 المرتبط بديناميكيات F-أكتين. عبر التبديل بين حالات مرتبطة بـGTP وGDP، يعزز هذا البروتين بلمرة وإزالة بلمرة F-أكتين على التوالي. تشير ملاحظاتنا الأولية إلى نموذج افتراضي حيث يستدعي الفازوبريسين كيناز تنظيم ارتباط الأنابيب الدقيقة 2 إلى الأجسام النهائية الإيجابية Rab11 حيث يفسفر نموذج PDZ في aquaporin-2 عند السيرين 269. يستدعي نموذج PDZ المفسفر وينشط بروتين فعال Rho GTPase 21، مما يؤدي إلى حالة مرتبطة بـGDP تعزز إزالة بلمرة F-أكتين. يساعد F-أكتين المفكك على اندماج حويصلات aquaporin-2 مع غشاء البلازما القمي. المجلس الوطني للعلوم والتكنولوجيا، تايوان، MOST 111-2320-B-002-084-MY3. هذا هو الملخص الكامل المقدم في مؤتمر American Physiology Summit 2024 ومتوفر فقط بصيغة HTML. لا توجد نسخ إضافية أو محتوى إضافي متوفر لهذا الملخص. لم يكن قسم الفسيولوجيا مشاركاً في عملية مراجعة الأقران.