تقييم عالي الإنتاجية للطفرات الجينية باستخدام مكتبات مستشعرات التحرير الأولي

غالبًا ما تحتوي جينومات الأورام على طيف معقد من التغيرات النيوكليوتيدية المفردة وإعادة ترتيب الكروموسومات التي يمكن أن تؤثر على وظيفة البروتين. تم تطبيق التحرير الأولي لتركيب وتقييم الطفرات الجينية، لكن الأساليب السابقة كانت محدودة بكفاءة المتغيرات المسترشدة للبروتينات. هنا نقدم استراتيجية مستشعر التحرير الأولي عالية الإنتاجية التي تربط بين المتغيرات المسترشدة للبروتينات والنُسخ الاصطناعية لمواقعها المستهدفة لتقييم التأثير الوظيفي للتغيرات الجينية الذاتية بشكل كمي. نقوم بفحص أكثر من 1,000 متغير ذاتي مرتبط بالسرطان لجين TP53، وهو الجين الأكثر تكررًا في السرطان، لتحديد الأليلات التي تؤثر على وظيفة p53 بطرق ميكانيكية متنوعة. نجد أن بعض الطفرات الذاتية لجين TP53، وبشكل خاص تلك الموجودة في منطقة تكتل p53، تظهر ظواهر معاكسة في أنظمة التعبير المفرط الأجنبية. تؤكد نتائجنا أهمية جرعة الجين الفسيولوجية في تشكيل النسبة الطبيعية للبروتين والتفاعلات بين البروتينات، وتؤسس إطارا لدراسة الطفرات الجينية في سياق تسلسلها الذاتي على نطاق واسع.