Key points are not available for this paper at this time.
التقنيات الحالية للاستنساخ التي تعتمد على إعادة التركيب المحددة للمواقع فعالة وسهلة الاستخدام ومرنة، ولكن لها عيب ترك تسلسلات مواقع إعادة التركيب في البناء النهائي، مما يضيف من 8 إلى 13 حمض أميني إلى البروتين المعبر عنه. لقد وضعنا استراتيجية بسيطة وسريعة للاستنساخ الفرعي لنقل أي جزء من الحمض النووي المطلوب من استنساخ دخول إلى متجه التعبير، دون هذه العيب. تستند الاستراتيجية إلى استخدام إنزيمات التقييد من النوع IIs، والتي تقطع خارج تسلسل التعرف الخاص بها. مع التصميم الصحيح لمواقع القطع، يمكن ربط شقين مقطوعين بواسطة إنزيمات التقييد من النوع IIs في منتج يفتقر إلى موقع التقييد الأصلي. استناداً إلى هذه الخاصية، تم وضع استراتيجية استنساخ تسمى استنساخ 'Golden Gate' التي تسمح بالحصول على حوالي مئة في المئة من البلازميدات المؤتلفة الصحيحة في أنبوب واحد وخطوة واحدة بعد تقييد-ربط لمدة 5 دقائق فقط. لذلك تعتبر هذه الطريقة فعالة مثل تقنيات الاستنساخ الحالية المعتمدة على إعادة التركيب ولكنها تنتج بلازميدات مؤتلفة لا تحتوي على تسلسلات غير مرغوب فيها في البناء النهائي، مما يوفر دقة لهذه العملية الأساسية في التلاعب الجيني.
درس إنجلر وآخرون (الثلاثاء) هذا السؤال.