تحويل 15N HSQC النقي في الوقت الحقيقي للبروتينات: تحسين حقيقي في الدقة والحساسية

تقلل الدقة الطيفية في طيفية الرنين المغناطيسي النووي البروتوني بسبب تقسيم الرنين إلى مجموعات متعددة نتيجة تأثير الاقترانات السكارين النووية المتجانسة. على الرغم من أن هذه التأثيرات غالبًا ما تخفى في طيفية الرنين المغناطيسي النووي البروتوني بسبب تدني الدقة الرقمية وعملية الإعداد الروتيني، إلا أن الاقترانات السكارين النووية المتجانسة تزيد من اكتظاظ الطيف خلف الكواليس. يتم توضيح الفرص المتاحة لتطبيقات البيوموليكولي في الرنين المغناطيسي النووي بواسطة طرق جديدة لتحويل النقاء هنا. يتم تحسين كل من الدقة والحساسية، دون أي زيادة في وقت التجربة. في هذه التجارب، يتم جمع انحلال التحريض الحر في bursts قصيرة من جمع البيانات، مع فترات زمنية قصيرة على مقياس مدة تطور J، متداخلة مع عناصر إعادة التركيز المناسبة. التأثير الصافي هو فصل زمن حقيقي (t2) واسع النطاق، مما يخمد هيكل المجموعة الناتج عن تفاعلات البروتون - بروتون. السمة الرئيسية لعناصر إعادة التركيز هي أنها تميز بين الرنات النشطة (الملاحظة) والرنيين السلبية (شريك الاقتران). يمكن تحقيق ذلك إما باستخدام إعادة التركيز الانتقائي النطاق أو بواسطة عنصر BIRD، في كلتا الحالتين مصحوبة بنبضة بروتون غير انتقائية بزاوية 180° . الأسلوب الأخير يختار الرنات النشطة بناءً على اقتران J المتغير بين الروابط (15)N، في حين أن الأول يختار منطقة من طيف (1)H . يتم تقديم العديد من التجارب الجديدة لتحويل النقاء، ويتم تقييم التحسينات في الدقة والحساسية التي توفرها هذه التجارب لعينات تمثيلية: منطقة N-terminal من PGK؛ اليوبكيتين؛ واثنين من الطفرات للبروتين المضاد للفطريات الصغير PAF. هذه التجارب الجديدة، التي تقدم حساسية ودقة محسنتين، لديها القدرة على استبدال تجارب HSQC القياسية الحالية.