طريقة جديدة وسريعة وحساسة لتدفق الخلايا تكشف عن تدهور RNA polymerase II المُتوقف القريب من المحفز في حضور وغياب الأشعة فوق البنفسجية

يظهر RNA polymerase II (RNAPII) كعامل مهم في استجابة الحمض النووي للتضرر، لكن كيفية استجابته للإجهاد الجيني لم تُفهم بالكامل. لقد طورنا طريقة سريعة وحساسة لتدفق الخلايا لدراسة ارتباط الكروماتين بـ RNAPII في خلايا البشر الفردية عبر دورة الخلية. تشير النتائج إلى زيادة بدء النسخ في نقاط زمنية مبكرة، حيث زادت مستويات RNAPII بعد 15-30 دقيقة من الضرر الحاصل في الحمض النووي الناتج عن الأشعة فوق البنفسجية. كان هذا واضحًا بشكل خاص لشكل RNAPII المُ phosphorylated S5 (pRNAPII S5)، الذي يرتبط عادةً بالتوقف القريب من المحفز. علاوة على ذلك، يحدث تدهور pRNAPII S5 كثيرًا، حيث كانت مستوياتها على الكروماتين معززة بقوة بواسطة مثبط البروتيازوم MG132 مع ودون الأشعة فوق البنفسجية. ومن المثير للاهتمام، أن تثبيط إفراج التوقف باستخدام 5،6-dichloro-1-beta-ribo-furanosyl benzimidazole (DRB) عزز من تدهور pRNAPII S5 الناتج عن الأشعة فوق البنفسجية، مما يشير إلى أن بدء النسخ المحسن قد يؤدي إلى ظاهرة "الاكتضاض القريب من المحفز" مما يؤدي إلى إنهاء مبكر عن طريق تدهور RNAPII. علاوة على ذلك، كانت مستويات pRNAPII S2 على الكروماتين أكثر استقرارًا في مرحلة S من دورة الخلية بعد ساعتين من الأشعة فوق البنفسجية، مما يدل على آثار محددة لدورة الخلية. إجمالًا، تظهر نتائجنا طريقة جديدة مفيدة وتقترح أن تدهور RNAPII القريب من المحفز يلعب دورًا كبيرًا غير متوقع خلال النسخ الطبيعي وبعد الأشعة فوق البنفسجية.