الملخص الحمض النووي الريبي البيئي (eRNA) يظهر كأداة واعدة للكشف عن وجود الأنواع و/أو الحالة الفسيولوجية في مراقبة التنوع البيولوجي، والسمية البيئية، والحفظ. ومع ذلك، مقارنة بالحمض النووي البيئي (eDNA)، فإن تحسين بروتوكولات تحليل eRNA لا يزال غير متطور نسبيا، ويقتصر الإجماع بين الباحثين. رغم أن تصميم وتنفيذ تحاليل eRNA له أوجه تشابه كثيرة مع تحاليل eDNA، هناك اعتبارات إضافية أساسية لازمة لحصول تحاليل eRNA محددة وحساسة مع تقليل الإيجابيات والسلبية الكاذبة. نفحص هذه الاعتبارات نقديا في هذا المنظور الحالي للتحليل بواسطة التفاعل المتسلسل للبوليميراز في الوقت الحقيقي (qPCR) موجه الهدف. يجب أن يكون اختيار أهداف الحمض النووي الريبي موجها بالأهداف المحددة لتحليل eRNA ويأخذ في الحسبان إزالة الحمض النووي الجينومي (gDNA) وتحويل الحمض النووي الريبي إلى cDNA قبل تحليل qPCR. يشمل ذلك النظر في نوع الحمض النووي الريبي ومصدره؛ ما إذا كان الحمض النووي الريبي المقاس يعمل كمؤشر فسيولوجي يعكس صحة الكائن الحي أو الإجهاد أو الأنماط السكانية؛ ما إذا كان الحمض النووي الريبي يعمل كمؤشر لوجود النوع؛ أو ما إذا كان الحمض النووي الريبي يستخدم كمعيار لمؤشرات الحالة الفسيولوجية. يجب أن يمتد تصميم البادئات والمجسات، عندما أمكن، عبر تقاطعات الإكسون-إكسون لتقليل تضخيم gDNA. إذا لم يكن ذلك ممكنا، يتطلب ذلك تفاعلات ناقصة بالنسخ العكسي (RT–) لكل عينة. يبدأ التحقق الصارم للتحليل بفحوصات حاسوبية مقابل تسلسلات النسخ الهدف وغير الهدف، تليها اختبارات مخبرية باستخدام cDNA المولد من مستخلصات RNA وgDNA من عينات مرجعية. يعزز وضع معايير أداء الحساسية مثل حد الكشف (LOD)، حد الكمية (LOQ)، وكفاءة التضخيم ثقة التحليل. يساعد التحقق الميداني لتحاليل eRNA باستخدام عينات بيئية تتواجد فيها الأنواع المستهدفة أو غائبة و/أو في حالة فسيولوجية مرغوبة (مثلاً، المعرضة للملوثات) على تقدير معدلات الإيجابيات والسلبية الكاذبة. نفحص نقدياً الممارسات الحالية لـ eRNA ونقدم إرشادات واقتراحات لتصميم وتنفيذ تحاليل eRNA ذات موثوقية عالية.
درس لوبيز وآخرون (Sun,) هذا السؤال.