لا تؤدي الحذفات في المنطقة شديدة التغير (HVR) في إطار القراءة المفتوحة 1 لفيروس التهاب الكبد E إلى إزالة قابلية الفيروس للإصابة: دليل على تخفيف الطفرات الحذفية لـ HVR في الجسم الحي

فيروس التهاب الكبد E (HEV) هو عامل ممرض بشري مهم، على الرغم من أنه لا يُعرف الكثير عن بيولوجيته وتكاثره. كشفت التحليلات التسلسلية المقارنة عن منطقة شديدة التغير (HVR) بها تغييرات تسلسلية واسعة في إطار القراءة المفتوحة 1 من HEV. لتوضيح دور HVR في تكاثر HEV، قمنا أولاً بإنشاء طفرات حذف HVR، hHVRd1 و hHVRd2، مع حذف في الإطار للأحماض الأمينية (aa) من 711 إلى 777 ومن 747 إلى 761 في HVR من ريبلكون HEV البشري من النمط الجيني 1. تم اكتشاف دليل على تكاثر HEV في خلايا Huh7 التي تم نقلها بـ RNA الريبوزومي من الطفرة hHVRd2، كما يتضح من التعبير عن بروتين الفلورسنت الأخضر المحسن. لتأكيد النتائج في المختبر، أنشأنا ثلاث طفرات HEV طيرية مع حذف HVR متنوعة: الطفرات aHVRd1، مع حذف aa 557 إلى 585 (Delta557-585)؛ aHVRd2 (Delta612-641)؛ و aHVRd3 (Delta557-641). أظهرت الدجاجات التي تم تلقيحها داخل الكبد باستخدام نسخ RNA المغلقة من الطفرات aHVRd1 و aHVRd2 تطور عدوى فيروسية نشطة، كما يتضح من تحويل للدم، وفيروس في الدم، وإفراز الفيروس في البراز، على الرغم من أن الطفرة aHVRd3، التي تحتوي على حذف كامل لـ HVR، كان من الواضح أنها مخففة في الدجاج. للتحقق من النتائج بشكل إضافي، أنشأنا أربع طفرات حذف HVR إضافية باستخدام فيروس HEV من النمط الجيني 3 كهيكل أساسي. أظهرت الطفرات sHVRd2 (Delta722-781)، sHVRd3 (Delta735-765)، و sHVRd4 (Delta712-765) قدرة على تحمل الحذفات وكانت مُعدية في الخنازير التي تلقت تلقيحاً داخل الكبد باستخدام نسخ RNA المغلقة من الطفرات، بينما أظهرت الطفرة sHVRd1 (Delta712-790)، التي تحتوي على حذف شبه كامل لـ HVR، نمط تفريغ في الخنازير المصابة. تشير البيانات من هذه الدراسات إلى أن الحذفات في HVR لا تتسبب في إلغاء قابلية HEV للإصابة في المختبر أو في الجسم الحي، على الرغم من أن الدليل على التخفيف لوحظ بالنسبة لطفرات HEV مع حذف أكبر أو شبه كامل لـ HVR.