تصوير المجهري للكشف البصري المغلق لتحسين التباين في الصور داخل الخلايا الحية

إحدى القيود على تصوير البروتينات الفلورية داخل الخلايا الحية هي أنها عادة ما تكون موجودة بأعداد صغيرة وتحتاج إلى اكتشافها على خلفية كبيرة. لقد طورنا الوسائل لعزل إشارات الفلورسنت المحددة من الخلفية باستخدام الكشف المغلق لإشعاع الفلورسنت المعدل من فئة من المجسات البصرية المسماة "المفاتيح الضوئية". يتضمن نهج الكشف المغلق البصري (OLID) تعديل انبعاث الفلورسنت من المجس من خلال التحكم البصري الحتمي في حالاته الفلورية وغير الفلورية، وتطبيق طريقة كشف مغلقة لعزل الإشارة المعدلة المعنية من الإشارات الخلفية غير المعدلة. يوفر تحليل الارتباط المتبادل مقياسًا للارتباط بين إجمالي انبعاث الفلورسنت داخل بكسلات مفردة من الصورة التي تم اكتشافها عبر عدة دورات من التبديل البصري وموجة مرجعية تم اكتشافها داخل نفس الصورة عبر نفس دورات التبديل. يوفر هذا النهج في التصوير وسيلة لاكتشاف الانبعاث من مجسات المفاتيح الضوئية بشكل انتقائي بين مجموعة أكبر من المجسات الفلورية التقليدية وهو متوافق مع المجاهر التقليدية. تم عرض OLID باستخدام مجسات قائمة على النيتروسبيرو بنزوبيرين والبروتين الفلوري Dronpa المشفر وراثيًا لتوليد صور ذات تباين عالٍ لهياكل محددة وبروتينات في خلايا مؤشّرة في الأعصاب المزروعة والمستخرجة وفي أجنة ضفادع حية وشراغيف سمك الزرد.