Key points are not available for this paper at this time.
لقد تأثرت دراسات الموت الخلوي بشكل كبير منذ إدخال طرق مقياس التدفق الخلوي. يُستخدم بروميد اليود (PI) على نطاق واسع بالتزامن مع الأنكسين V لتحديد ما إذا كانت الخلايا حية أو ميتة مبرمجة أو نخرية من خلال الاختلافات في سلامة غشاء الخلية ونفاذيته. يُعتبر بروتوكول الأنكسين V/PI نهجًا شائعًا لدراسة الخلايا الميتة مبرمجًا. يُستخدم PI بشكل أكثر شيوعًا من الأصباغ النووية الأخرى لأنه اقتصادي ومستقر ومؤشر جيد على حيوية الخلايا، بناءً على قدرته على استبعاد الصبغة في الخلايا الحية. تعتمد قدرة PI على الدخول إلى الخلية على نفاذية الغشاء؛ حيث لا يلون PI الخلايا الحية أو الخلايا الميتة مبرمجًا في وقت مبكر بسبب وجود غشاء خلوي سليم. في الخلايا الميتة مبرمجًا المتأخرة والخلايا النخرية، تنخفض سلامة الأغشية البلازمية والنووية، مما يسمح لـ PI بعبور الأغشية والاندماج في الأحماض النووية وعرض الفلورسنت الحمراء. للأسف، نجد أن بروتوكولات الأنكسين V/PI التقليدية تؤدي إلى عدد كبير من الأحداث الإيجابية الزائفة (حتى 40%)، المرتبطة بتلوين RNA بواسطة PI داخل الحيز الخلوي. تتأثر الخلايا الأولية وخطوط الخلايا في مجموعة واسعة من نماذج الحيوانات، حيث تظهر الخلايا الكبيرة (نسبة النووي: السيتوبلازم <0.5) أعلى حدوث. هنا، نقدم طريقة الأنكسين V/PI المعدلة التي توفر تحسينًا كبيرًا في تقييم موت الخلايا مقارنة بالطرق التقليدية. تستفيد هذه البروتوكولات من التغيرات في نفاذية الخلايا أثناء تثبيت الخلايا لتعزيز دخول RNase A إلى الخلايا بعد التلوين. وقد تم تحسين توقيت وتركيز RNase A لإزالة RNA السيتوبلازم. كانت النتيجة تحسينًا كبيرًا مقارنة ببروتوكولات الأنكسين V/PI التقليدية (أقل من 5% من الأحداث مع تلون PI في السيتوبلازم).
درس ريجر وآخرون (سون،) هذا السؤال.