بروتينات فلورية زرقاء وصفراء فائقة مع تحسين السطوع، وطيات البروتين، ونصف قطر نقل طاقة فورتسير.

تستخدم البروتينات الفلورية الزرقاء والصفراء المحسنة على نطاق واسع في التصوير ثنائي اللون والدراسات المتعلقة بتفاعل البروتينات بناءً على نقل طاقة الرنين الفلوري. يمكن أن يقتصر استخدام هذه البروتينات الفلورية على حساسيتها الحرارية، وضعف الفلورية، ورغبتها في التجمع. هنا نبلغ عن نتائج نهج الطفرات الموجهة لتحسين هذه البروتينات الفلورية. قمنا بإنشاء متغيرات معزولة مُحسَّنة من ECFP وEYFP، التي تطوى بشكل أسرع وأكثر فاعلية عند 37 درجة مئوية ولها ذوبانية وسعة سطوع متفوقة. كانت البكتيريا التي تعبر عن SCFP3A أكثر سطوعاً بـ 9 مرات من تلك التي تعبر عن ECFP وأكثر سطوعًا بـ 1.2 مرة من البكتيريا التي تعبر عن Cerulean. يمتلك SCFP3A عائد كمي متزايد (0.56) ومدة فلورية. كانت البكتيريا التي تعبر عن SYFP2 أكثر سطوعًا بـ 12 مرة من تلك التي تعبر عن EYFP(Q69K) والأكثر سطوعًا تقريبًا بـ 2 مرة من البكتيريا التي تعبر عن Venus. في خلايا HeLa، كانت التحسينات أقل وضوحًا؛ ومع ذلك، كانت الخلايا التي تعبر عن SCFP3A وSYFP2 أكثر سطوعًا بمقدار 1.5 مرة من الخلايا التي تعبر عن ECFP وEYFP(Q69K) على التوالي. تعتبر التحسينات في SCFP3A وSYFP2 على الأرجح نتيجة لزيادة السطوع الجوهري (1.7 مرة و1.3 مرة للبروتينات المعاد تنقيتها، مقارنة بـ ECFP وEYFP(Q69K) على التوالي) وأيضًا بسبب تحسين طي البروتين ونضوجه. تسهم هذه التحسينات بشكل كبير في زيادة العائد الفلوري في البكتيريا بينما تبدو أقل أهمية في أنظمة الخلايا الثديية. تشكل SCFP3A وSYFP2 زوج مانح-مستقبل متفوق لنقل طاقة الرنين الفلوري، بسبب العائد الكمي العالي والفترة الزمنية المتزايدة لـ SCFP3A و معامل الامتصاص المرتفع لـ SYFP2. علاوة على ذلك، تم توصيف SCFP1، وهو متغير CFP مع فترة فلورية قصيرة ولكنه له طيف مطابق مقارنةً بـ ECFP وSCFP3A. باستخدام الفرق الكبير في فترة الحياة بين SCFP1 وSCFP3A، تمكنا للمرة الأولى من أداء تصوير ثنائي الحياة للأنواع الفلورية المطابقة طيفيًا في خلايا حية.