حفظ البويضات من حيوان الهامستر لقياس قدرة الحيوانات المنوية البشرية على الإخصاب

نجت ما بين 70 و80% من بويضات الهامستر المحفوظة في الغلاف من التجمد بعد التبريد البطيء (حوالي 0.3 درجة مئوية/دقيقة) إلى -80 درجة مئوية في الوسط PB1 المحتوي على 1.5 أو 2.0 M-DMSO قبل النقل إلى -196 درجة مئوية. بعد التسخين البطيء (حوالي 8 درجات مئوية/دقيقة)، لم يكن هناك فرق في البقاء إذا تم تخفيف الـ DMSO بخطوة بطيئة أو إضافة سريعة لمحلول المتوسط. عندما تم إنهاء التبريد البطيء عند -40 درجة مئوية عبر النقل المباشر إلى -196 درجة مئوية، نجت حتى 75% من البويضات من التسخين السريع (حوالي 500 درجة مئوية/دقيقة) والتخفيف السريع إذا كان الوسط يحتوي على 2.0 M-DMSO. تم حساب معدلات البقاء بناءً على عدد البويضات المذابة التي احتفظت بمظهرها الشكلي الطبيعي بعد فترة حاضنة مدتها ساعة واحدة قبل إزالة الغلاف المعوي باستخدام التربسين. تم اختراق جميع هذه البويضات بعد الحضن مع الحيوانات المنوية الفأرية، مما يدل على أن إجراء التجميد نفسه لا يؤثر سلبًا على اختراق البويضات المجمدة والمذابة بواسطة الحيوانات المنوية غير المتجانسة. لم يكن هناك فرق في معدل اختراق الحيوانات المنوية البشرية للبويضات المجمدة (34%) أو الطازجة (42%) عند استخدام محلول Tyrode المزلل بالـ Hepes والذي يحتوي على 30 ملغ من BSA/مل و2.0 M-DMSO كوسيلة للتجميد. ومع ذلك، تم اختراق عدد أقل من البويضات المجمدة في وسط PB1 المحتوي على 4 ملغ من BSA/مل و2.0 M-DMSO بواسطة الحيوانات المنوية البشرية (18%) مقارنةً بالبويضات المجمعة حديثًا (38%). لم تنجُ البويضات الخالية من الغلاف من إجراء التجميد بنفس قدر النقاء مثل البويضات المحفوظة في الغلاف. يوفر بقاء بويضات الهامستر المخزنة عند -196 درجة مئوية وسيلة مريحة لتزويد هذه البويضات ونقلها لتقييم قدرة الإخصاب للحيوانات المنوية البشرية وغيرها من الحيوانات المنوية غير المتجانسة.