العزل السريع والتنقية للميتوكوندريا من أجل الزرع عن طريق تفكيك الأنسجة والترشيح التفاضلي

تتطلب طرق العزل الميتوكوندري الموصوفة سابقًا باستخدام الطرد المركزي التفاضلي و/أو الطرد المركزي بتدرج فيكول 60 إلى 100 دقيقة لإكمال العملية. نقوم بوصف طريقة للعزل السريع للميتوكوندريا من خزعات الثدييات باستخدام جهاز تفكيك الأنسجة التجاري والترشيح التفاضلي. في هذا البروتوكول، يتم استبدال التماثل اليدوي بدورة التماثل القياسية لجهاز تفكيك الأنسجة. يسمح ذلك بتماثل موحد ومتسق للنسج وهو ما لا يمكن تحقيقه بسهولة مع التماثل اليدوي. بعد تفكيك الأنسجة، يتم ترشيح المزيج من خلال فلاتر شبكية نايلون، مما يلغي خطوات الطرد المركزي المتكررة. نتيجة لذلك، يمكن إجراء العزل الميتوكوندري في أقل من 30 دقيقة. يوفر هذا البروتوكول حوالي 2 × 10(10) ميتوكوندريا قابلة للحياة وذات كفاءة في التنفس من عينة أنسجة وزنها 0.18 ± 0.04 جرام (الوزن الرطب).