أعداد وتنظيم بوليميرات RNA، النصوص الناشئة، ووحدات النسخ في نوى خلايا هيلا

باستخدام خلايا هيلا، قمنا بتطوير طرق لتحديد 1) عدد بوليميرات RNA النشطة في أي لحظة، 2) عدد مواقع النسخ، و3) عدد البوليميرات المرتبطة بوحدة نسخ واحدة. لعدّ البوليميرات المتفاعلة، تم احتواء الخلايا في الأagarose، وجعلها منفذة، ومعالجتها برينونكلياز، وتم تمديد النصوص الآن المقطوعة في 32Puridine triphosphate؛ تم حساب عدد النصوص المتنامية من العدد الإجمالي للنيوكليوتيدات المدمجة والزيادة المتوسطة في طول النصوص. تم إطالة حوالي 15,000 نص بواسطة بوليميراز I، وحوالي 75,000 بواسطة بوليميرات II و III. تم اكتشاف مواقع النسخ بعد زراعة الخلايا في بروموريدين لمدة <2.5 دقيقة، وبعد ذلك تم وضع علامة على RNA البروبومو بالجزيئات الذهبية؛ أظهرت المجهرية الإلكترونية أن معظم النصوص الخارجة من النواة كانت مركزة في حوالي 2400 موقع بقطر حوالي 80 نانومتر. تم عدّ عدد البوليميرات المرتبطة بوحدة النسخ بعد نشر القوالب على مساحة كبيرة؛ كانت معظم الوحدات الخارجية من النواة مرتبطة بتعقيد إطالة واحد. تشير هذه النتائج إلى أن العديد من القوالب مرتبطة في "سحابة" من الحلقات حول موقع؛ كل موقع، أو "مصنع" نسخ، من المحتمل أن يحتوي على حوالي 30 بوليميراز نشط والنصوص المرتبطة بها.