كشف فعال لمكتبات التعبير عن cDNA الفيروسية العكسية.

تم وصف استنساخ التعبير عن cDNAs لأول مرة قبل عقد من الزمان وكان يعتمد على التعبير المؤقت لمكتبات cDNA في خلايا COS. بالمقارنة مع النقل المؤقت للـ plasmids، فإن نقل الجينات الفيروسية العكسية ينقل الجينات بشكل مستقر إلى مجموعة واسعة من الخلايا المستهدفة. نحن نستخدم نظام تعبئة بسيط لإنتاج مخزون فيروس عكسي عالي الت titration من مكتبات cDNA لإنشاء نظام استنساخ التعبير عن cDNA. في تجربتين نموذجيتين، تم إحداث عدوى لخلايا Ba/F3 المعتمدة على الإنترلوكين (IL)-3 بواسطة مكتبات من cDNA المعبر عنها فيروسياً عكسياً مشتقة من mRNA خلايا T البشرية أو mRNA خط خلايا TF-1 المعتمد على IL-3. تم اختيار خلايا Ba/F3 المصابة للتعبير عن CD2 بواسطة تحليل التدفق الخلوي أو للفرع ألفا لمستقبل IL-3 البشري (hIL-3R alpha) من خلال النمو المعتمد على العوامل. تم الكشف عن cDNAs في CD2 (التردد، 1 في 10(4)) و hIL-3R alpha (التردد، 1 في 1.5 x 10(5)) بسهولة في تجارب صغيرة الحجم، مما يشير إلى أن هذا النظام لاستنساخ التعبير الفيروسي العكسي فعال بما فيه الكفاية لاستنساخ cDNAs منخفضة الوفرة من خلال تعبيرها أو وظيفتها.