تنظيم كيناز البروتين المعتمد على أدينوزين 3′،5′-مونوفوسفات

ملخص من أجل دراسة تأثيرات الهرمونات على كيناز البروتين المعتمد على الأدينوزين 3'،5'-مونوفوسفات (cAMP) في الأنسجة الدهنية، كان من الضروري دراسة خصائص الإنزيم في مستخلصات الأنسجة الخام. كان هناك تنشيط واضح للإنزيم بواسطة NaF، ولكن من المحتمل أن يكون هذا التأثير بسبب تثبيط نشاط الأدينوزين ثلاثي الفوسفاتاز. كان نشاط الفوسفودايستراز في المستخلصات منخفضًا تحت ظروف التجارب. تم وصف طريقتين لتحديد حالة تنشيط كيناز البروتين في المستخلصات الخام. كلتا الطريقتين تستندان إلى كميات كيناز البروتين غير النشط (الهولوإنزيم) والوحدة التحفيزية النشطة الموجودة. في الإجراء الأول، يتم قياس نسبة نشاط كيناز البروتين، أي نسبة النشاط في غياب إلى النشاط في وجود cAMP. عند 0° في وجود 0.5 م NaCl، لم تتأثر نسبة نشاط كيناز البروتين بتخفيف المستخلصات. في ظل هذه الظروف، عندما تمت إزالة cAMP عن طريق الترشيح الهلامي، انخفضت نسبة النشاط ببطء شديد، لكنها انخفضت بسرعة في غياب NaCl. من المحتمل أن يُثبط الملح ارتباط الوحدتين التنظيمية والتحفيزية لكيناز البروتين. في الإجراء الثاني لتحديد حالة تنشيط كيناز البروتين، تم فصل مستخلصات الأنسجة الدهنية الخام على أعمدة سفيدكس G-100 وتم تقدير المساحات تحت منحنيات ذروتين لنشاط الإنزيم المرتبط بالهولوإنزيم والوحدة التحفيزية. تم تثبيط ارتباط وحدات كيناز البروتين أثناء هذا الإجراء باستخدام كلوريد الصوديوم (0.5 م) عند 0°. كما تم تحديد ملفات سفيدكس G-100 لكيناز البروتين في مستخلصات قلبية ودماغية وكبدية خامة أيضًا. كما وُجد أن كلوريد الصوديوم (0.5 م) يزيد من نسبة نشاط كيناز البروتين في وجود cAMP. عند 0°، حدث هذا الارتفاع ببطء نسبيًا وكان مصحوبًا بزيادة في ارتباط cAMP وانخفاض في الاحتياجات الخاصة بenzyme activity.