تطوير اختبار RT-PCR بتقنية الإفراز المناعي المتعدد للكشف والتفريق بين فيروس فسيفساء الطماطم وفيروس فسيفساء التبغ

تم تطوير اختبارات RT-PCR بتقنية الإفراز المناعي (IC) للكشف عن فيروس الطماطم (ToMV) وفيروس فسيفساء التبغ (TMV) في مستخلصات التنوب والصنوبر. عندما تم تخفيف الفيروسات المنقية في مستخلصات الجذر أو الإبر من الشتلات الصنوبرية الخالية من الفيروسات، كانت اختبارات IC-RT-PCR قادرة على الكشف عن الفيروسات المستهدفة الخاصة بها في تركيزات تتراوح بين 10-100 fg ml(-1). مقارنة مع حساسية الكشف بواسطة ELISA والتي كانت 1 ng ml(-1). تم تصميم البرايمرات من مناطق ذات تنوع تسلسلي مرتفع. تم تأكيد خصوصية جميع أزواج البرايمرات من خلال تسلسل منتجات PCR. كانت PCR قادرة على التمييز بين الفيروسين بشكل أكثر موثوقية من ELISA. علاوة على ذلك، تم تطوير اختبار IC-RT-PCR متعدد للكشف والتفريق في الوقت نفسه بين TMV و ToMV. عند تلقيح مستخلصات الجذر بكلا الفيروسين في نفس الوقت، كان الاختبار المتعدد قادراً على كشف كل فيروس في تركيزات تتراوح بين 1-10 pg ml(-1). تم تضخيم وتفريق ستة عزلات من TMV و18 من ToMV من مختلف العوائل، وعينات مياه وعينة تربة من خلال IC-RT-PCR متعدد. لم يتم ملاحظة أي تضخيم ضد فيروس الخمري اللطيف وفيروس فسيفساء الأعشاب ضد ستة فيروسات تنتمي إلى مجموعات تصنيفية أخرى.