Key points are not available for this paper at this time.
الخلفية: أدت التطورات الحديثة في تقنيات الصبغ داخل الخلايا، وتكنولوجيا السيتومتر، والمواد الكيميائية الفلورية، وإنتاج الأجسام المضادة إلى توسيع عدد المستضدات داخل الخلية التي يمكن تحليلها بواسطة قياس التدفق الخلوي. لقد قدم قياس فسفرة البروتين باستخدام الأجسام المضادة المحددة للفوسفور رؤى في سلاسل الإشارات الخاصة بالكينازات. ومع ذلك، يمكن أن تختلف التقنيات المتاحة لصبغ التطبيقات الفوسفورية بشكل كبير، مما يجعل من الضروري فهم الاختلافات بين النتائج عند تطبيق مثل هذه التقنيات وتطوير طرق تطبيق موثوقة وقابلة للتكرار. الطرق: تم اختبار عشرة تقنيات مختلفة لتثبيت الخلايا ونفاذيتها لقدرتها على توفير صبغ محدد للفوسفور. تم استخدام تركيبات من الفورمالدهيد، الميثانول، الإيثانول، الأسيتون، Triton X-100، والصابونين كمواد لتثبيت ونفاذية الخلايا. تم وضع الأجسام المضادة المحددة للفوسفور مع أصباغ ألكسا فلور لتوفير تحليل متعدد الألوان لأحداث الإشارة المختلفة في وقت واحد داخل خلايا فردية. النتائج: أعطى تثبيت الخلايا باستخدام 1.5% من الفورمالدهيد تلاه نفاذية في الميثانول نتائج مثالية لعمليات صبغ pERK، pp38، pJNK، pStat1، pStat5، وpStat6. أثر تغيير أوقات تثبيت الفورمالدهيد ونفاذية الميثانول على قياسات تحفيز الفسفرة. كانت تحليلات قياس التدفق الخلوي المحددة للفوسفور تتوافق بشكل جيد مع تحليل Western blot، مما يوفر تحققًا عبر منصات التقنية. الاستنتاجات: يوفر قياس أحداث الفسفرة بواسطة قياس التدفق الخلوي طريقة سريعة وفعالة لقياس سلاسل الكينازات في الخلايا الفردية. يسمح استقرار التطبيقات الفوسفورية في الميثانول بالتخزين طويل الأمد للعينات قبل التحليل. يمكن مراقبة العديد من سلاسل الإشارة في وقت واحد من خلال استخدام علامات فلوروفور مختلفة لتحديد نوعية الروابط أو المثبطات. قد يسمح تطبيق تقنيات محسّنة على أنواع الخلايا غير المتجانسة مثل خلايا الدم المحيطية أو طحالب الطحال الفأرية بتحليل الإشارات في مجموعات الخلايا المناعية بشكل متزامن.
درس Krutzik وآخرون (الأربعاء) هذا السؤال.