الهندسة الوراثية باستخدام فوسفات الكالسيوم

تقدم هذه الوحدة طريقتين للهندسة الوراثية لخلايا حقيقية النواة تعتمد على فوسفات الكالسيوم يمكن استخدامها لكل من الهندسة الوراثية المؤقتة والثابتة. في هذه البروتوكولات، يتم إدخال الحمض النووي البلازميدي إلى ثقافات الخلايا المسطحة عبر راسب يلتصق بسطح الخلية. يتم استخدام محلول مدعوم بهيدرات المركبات الهيدروجينية لتكوين راسب فوسفات الكالسيوم الذي يضاف مباشرة على الخلايا. بالنسبة لبعض الخلايا، فإن صدمة الخلايا باستخدام الجلسرين أو DMSO تعزز من كفاءة الهندسة الوراثية. في الطريقة البديلة عالية الكفاءة، يتم استخدام نظام مدعوم بـ BES يسمح بتكوين الراسب تدريجياً في الوسط ثم تساقطه على الخلايا. بينما تكون الطريقة البديلة فعالة بشكل خاص لتحويل ثابت للخلايا باستخدام الحمض النووي البلازميدي الدائري، تسفر كلا البروتوكولين عن نتائج مشابهة للتحويل باستخدام الحمض النووي البلازميدي الخطي أو الحمض النووي الجينومي، أو للتعبير المؤقت.