تحليل بلازميدات استنساخ المحفز: تحليل بنية التشغيل في منطقة الريف من الإشريكية القولونية وعزل طفرات محسنة للمحفز الداخلي

باستخدام المركبة الخاصة باستنساخ المحفز التي وصفها آن وفريزن (J. Bacteriol. 140:400-410, 1979)، تم استنساخ قطع الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين الصبغي للإشريكية القولونية المأخوذة من الفاج الناقل lambda drifd18 في أحد عدة مواقع فريدة لنقائل الإنزيمات القاطعة المجاورة لجينات التتراسيكلين (tet) التي تفتقر إلى محفز خاص بها. تم استخدام أحد هذه البلازميدات لعزل تسع متغيرات تحتوي على طفرات تقع في محفز داخلي افتراضي يقع بين rplL و rpoB. أظهرت تحليل تسلسل الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين أنه، في جميع الطفرات التسع، أدت تغير قاعدة واحد، من C إلى T، في موقع تعرف إنزيم RNA البوليميراز إلى زيادة كبيرة في نشاط المحفز. كشفت تحليل مجموعة متنوعة من البلازميدات التي تم فيها دمج tet مع محفزات مختلفة عن النتائج التالية: (i) تم نسخ rplK و rplA، جينات بروتين الريبوسوم L11 و L1، على وجه السواء من محفز مشترك يقع upstream من rplK؛ (ii) كان هناك محفز قوي في المنطقة بين عملية rplKA و rplJ، الجين لبروتين الريبوسوم L10؛ (iii) كانت هناك منطقة مثبطة تقع بين rplL، الجين لبروتين الريبوسوم L12، و rpoB، الجين لوحدة RNA البوليميراز بيتا؛ (iv) انتهي النسخ فورًا بعد rpoC، الجين لوحدة RNA البوليميراز بيتا؛ (v) كان هناك جين مشفر لبروتين غير معروف U، الذي يقع بين tufB وعملية rplKA، لديه محفزه الخاص؛ (vi) تم فصل جين tufB عن جميع الجينات الواردة أعلاه وكان لديه محفزه الخاص.