تفاعل بين بروتين إصلاح الحمض النووي XRCC1 DNA والليغاز III.

XRCC1، الجين البشري الذي يصحح تمامًا الطفرة EM9 لإصلاح الحمض النووي في مبيضي الهامستر الصيني، يشفر بروتينًا مرتبطًا بإعادة ربط انكسارات نطاق الحمض النووي الأحادي التي تحدث بعد العلاج بمواد قلوية أو إشعاع مؤين. في هذه الدراسة، تم بناء جين مصغر cDNA يشفر XRCC1 المسمى بالهيد histidine لتسهيل عملية التنقية بالاستشراب الجاذبية للبروتين المؤتلف. هذه البنية، المعروفة باسم pcD2EHX، صححت تمامًا نمط EM9 من تبادل الكروماتيد الشقيق العالي، مما يشير إلى أن علامة الهستيدين لم تؤثر سلبًا على نشاط XRCC1. أسفرت عملية استشراب الجاذبية لاستخراج من خلايا EM9 التي تم نقلها باستخدام pcD2EHX عن تنقية مشتركة لنشاط XRCC1 المسمى والهيد histidine ونشاط الليغاز III. لم يكن نشاط XRCC1 أو الليغاز III يتم تنقيته خلال استشراب الجاذبية لاستخراج من خلايا EM9 المنقولة باستخدام pcD2EX، وهو جين مصغر cDNA يشفر XRCC1 بدون علامة، أو استخراج من خلايا AA8 العادية أو خلايا EM9 غير المنقولة. تشير التنقية المشتركة لنشاط الليغاز III مع XRCC1 المسمى بالهستيدين إلى أن البروتينين موجودان في الخلية كمعقد. علاوة على ذلك، كان نشاط الليغاز III موجودًا بمستويات أقل في خلايا EM9 مقارنة بخلايا AA8 وعاد إلى مستويات طبيعية في خلايا EM9 التي تم نقلها باستخدام pcD2EHX أو pcD2EX. تشير هذه النتائج إلى أن XRCC1 مطلوب لمستويات طبيعية من نشاط الليغاز III، وت implicate دورًا رئيسيًا لهذا الليغاز في إصلاح كل من قاعدة الحمض النووي في خلايا الثدييات.