العزل المباشر لخلايا البذور العصبية الملتزمة من الفئران المعدلة وراثياً التي تعبر عن بروتينات فلورية مميزة طيفياً منظمة بواسطة محفزات عصبية محددة المرحلة

تنشأ العديد من الأنسجة من خلايا جذعية متعددة القدرات من خلال تخصيص نوع الخلايا والنضوج. في نخاع العظام، تولد الخلايا الجذعية الأولية جميع الأنواع المختلفة من خلايا الدم عبر التمايز التسلسلي لخلايا البذور المتزايدة الالتزام. قد مكنت العلامات السطحية للخلايا التي تميز بوضوح بين الخلايا الجذعية والبذور المقيدة والناتج المتمايز الباحثين من عزل هذه الخلايا ودراسة الآليات التنظيمية لتكوين الدم. يبدو أن التمايز العصبي ينطوي على آليات مشابهة. ومع ذلك، لم يتم توصيف خلايا البذور العصبية المقيدة لمصير عصبي في الجسم الحي، لأن علامات السطح الخلوية المحددة غير متاحة. لقد طوّرنا استراتيجية بديلة لتحديد وعزل خلايا البذور العصبية استناداً إلى بروتينات فلورية مزدوجة اللون. لتحديد وعزل خلايا البذور مباشرة من نسيج الدماغ دون الحاجة إلى أي إدخال أو زراعة خلوية متداخلة، قمنا بإنشاء سلالات من الفئران المعدلة وراثيا تحمل جينات فلورية منظمة بواسطة محفزات عصبية. عبرت مجموعة واحدة من السلالات المعدلة وراثيا عن بروتين فلوري أصفر معزز (EYFP) في خلايا البذور العصبية والعصبونات تحت السيطرة المباشرة لمحفز الألفا-توبولين Talpha1. بينما عبرت سلالة أخرى عن بروتين فلوري أخضر معزز (EGFP) في الخلايا العصبية غير الناضجة تحت السيطرة المباشرة لعناصر التعزيز/المحفز لجين نستن. من خلال تهجين هذه السلالات حصلنا على فئران تعبر عن كلا الجينين المعدلين. لعزل خلايا البذور العصبية مباشرة من الدماغ النامي، استخدمنا قياس التدفق الخلوي، واختارنا الخلايا التي عبرت عن EGFP و EYFP في الوقت نفسه. نتوقع أن توفر هذه الاستراتيجية مادة قيمة لدراسة آليات تكوين الأعصاب وتطوير علاجات قائمة على الخلايا للاضطرابات العصبية.