نشاط إنزيم ثلاثي فوسفات النوكليوزيد 5' المعتمد على الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين لبروتين الجين 4 من البكتيريوفاج T7.

بروتين الجين 4 من البكتيريوفاج T7 هو عبارة عن بريميرز وهليكاز في آن واحد. في هذه الورقة، نقدم وصفاً مفصلاً لنشاط ثالث، وهو تحلل ثلاثي فوسفات النوكليوزيد المعتمد على الحمض النووي المفرد الشريطة، ونظهر أن هذا النشاط مرتبط بالانتقال أحادي الاتجاه لبروتين الجين 4 على الحمض النووي المفرد الشريطة. المثبط التنافسي لعملية تحلل NTP، بيتا، غاما-ميثيلين dTTP، هو أيضًا مثبط قوي لتخليق الحمض النووي المعتمد على البروتين الجين 4 الذي يبدأ بـ RNA؛ التثبيط ليس نتيجة لتثبيط مباشر لبوليميراز الحمض النووي T7 أو تخليق بريميرات RNA. نستنتج أن الطاقة المستمدة من تحلل NTP بواسطة بروتين الجين 4 مطلوبة لانتقال البروتين إلى مواقع التعرف على البريمير. تدعم قياسات معدلات التحلل لـ NTPs باستخدام مجموعة متنوعة من الحمض النووي ذا البنية والطول المعروفين الانتقال أحادي الاتجاه لبروتين الجين 4 على الحمض النووي المفرد الشريطة. الحمض النووي المزدوج، RNA، والحمض النووي المفرد الشريطة المغلف ببروتين ربط الحمض النووي المفرد الشريطة لا تعمل كعوامل فعالة لإنزيم ثلاثي فوسفات النوكليوزيد لبروتين الجين 4. تشير البيانات الحركية إلى أن بروتين الجين 4 لا يبقى مرتبطًا ببريميرات الأوليغوريبونيوكليوتيد التي تم تخليقها حديثًا ولكنه يستمر في البحث عن مواقع أخرى للتعرف على البريمير. على الرغم من أن جميع NTPs الطبيعية السائدة باستثناء rCTP يتم تحللها بواسطة بروتين الجين 4، يظهر الإنزيم تخصصاً لـ dTTP مع قيمة Km تبلغ 0.4 مللي مول. في الورقة المرافقة، نوضح أن تحلل NTPs مطلوب أيضًا لكي يعمل البروتين كهيليكاز في المناطق المزدوجة من الحمض النووي.