تفعيل كينازات المعتمدة على السايلين البشري في المختبر.

لقد قمنا بتحليل تفعيل كينازات المعتمدة على السايلين البشري في نظام خالٍ من الخلايا. تم إنتاج كيناز CDC2 البشري وكيناز المعتمد على السايلين 2 (CDK2) والسايلين A والسايلين B1 في خلايا الحشرات من خلال العدوى بفيروسات باكلا فيروس المعاد تركيبها. يمكن تنشيط كيناز CDC2 أو CDK2 في مستخلصات الخلايا المصابة عن طريق إضافة مستخلصات تحتوي على السايلين A أو B1. كان تفعيل كيناز CDC2 بواسطة السايلين B1، بالإضافة إلى تفعيل CDK2 بواسطة السايلينات A وB1، مصحوبًا بتكوين معقدات عالية الوزن الجزيئي. بالمقابل، لم يرتبط كيناز CDC2 بفاعلية مع السايلين A. تمت دراسة تفعيل كيناز CDC2 بواسطة السايلين B1 بالتفصيل ووجد أنه كان مصحوباً بفوسفاتة كيناز CDC2 على ثريونين 161. حدث ارتباط كيناز CDC2 مع السايلين B1 أيضًا في ظروف تم فيها منع فوسفاتة كيناز CDC2، مما أدى إلى تكوين معقد غير نشط يمكن أن يتم فوسفاتته وتنشيطه عند إضافة مستخلص الخلايا. كما أن كيناز CDC2 النقي للغاية والسايلين B1 كوّنا معقدات غير نشطة يمكن تنشيطها بطريقة تعتمد على ATP بواسطة مكونات غير معروفة في مستخلصات الخلايا الخام. تشير هذه البيانات إلى أن عملية تفعيل كيناز CDC2 تبدأ بارتباط السايلين، وبعد ذلك تؤدي فوسفاتة كيناز CDC2، المحفزة بواسطة إنزيم منفصل، إلى التنشيط.