تحليل منتج جين التحول لفيروس الساركوما رُوس.

تصف هذه التقرير نتائج كمية للفوسفوريلation في المختبر لمنتج جين التحول لفيروس الساركوما رُوس، pp60src، باستخدام ATP أو GTP كمانحي فوسفات. كانت قيم Km للفوسفوريلation من pp60src بواسطة ATP و GTP متشابهة (10-36 و 25-36 ميكرومول، على التوالي) وكانت قيم Vmax مختلفة (5-7 و 1.5-1.7 نانومول في الدقيقة لكل ملغ من pp60src، على التوالي). تم تثبيط العلامة المشعة لـ pp60src بواسطة gamma-32P ATP بواسطة ADP و dATP عند تركيزات أعلى بمقدار 20 ضعفاً بنسبة 75 و 83%، على التوالي. كانت النيوكليوتيدات الأخرى بمثابة مثبطات أضعف تحت نفس الظروف. كانت العلامة المشعة لـ pp60src بواسطة gamma-32PGTP أقل تحديداً لهذا النيوكليوتيد، حيث كان لـ ATP و dATP و ADP و dGTP و GDP و TTP تأثير مثبط لا يقل عن 50%. تم إظهار أن المنتجات الفوسفورية بوزن جزيئي تقريباً = 60,000 التي تم إنتاجها باستخدام ATP أو GTP هي نفس جزيء البروتين حيث يمكن ترسيبها بواسطة الأجسام المضادة المرفوعة ضد p60src الناتجة عن المتجانسات البكتيرية. كشفت التحليلات الهيكلية أن استخدام GTP أدى إلى فوسفوريلation لبقايا التيروسين في منطقة النهاية COOH لـ pp60src، على ما يبدو نفس الموقع الذي يحتوي على التيروسين الفوسفوري في الخلايا المصابة. بالمقابل، أدى استخدام ATP إلى فوسفوريلation لعدة بقايا تيروسين إضافية في منطقة النهاية NH2 للجزيء. في دراسات الثيرمو لابليتي، كانت قيم t1/2 للفوسفوريلation لـ pp66src في تحضيرات من خلايا الدجاج المصابة بفيروس النوع البري هي 5.1 دقيقة لكل من ATP و GTP، بينما كانت قيم t1/2 للفوسفوريلation لـ pp60src في تحضيرات من خلايا المصابة بطفرة تحول حساسة للحرارة هي 1.1 دقيقة لكل من مانحي الفوسفات. تم العثور على ملاحظات مشابهة باستخدام الكازين ألفا كركيزة.