إزالة الإندوكسين من عينات rAAV باستخدام بروتوكول بسيط يعتمد على المنظفات

الإندوكسين هو الملوث الأكثر شيوعًا الموجود في عينات البروتين. حتى كمية صغيرة من الإندوكسين يمكن أن تحفز رد فعل تحسسي قوي وموت كائن مضيف. يتم أيضًا اكتشاف الإندوكسين عادةً في مخزونات الفيروسات المعاد تأهيلها المرتبطة بالأدينوفيروس (rAAV) التي تم إعدادها في مختبرات البحث باستخدام مواد كيميائية متاحة بسهولة؛ حيث أن تنقية مخزونات rAAV من الإندوكسين باستخدام مواد كيميائية تجارية تؤدي أحيانًا إلى فقدان كبير في التركيز. تتفاقم المشكلة بسبب التنوع المتزايد مؤخرًا لواجهة rAAV ونماذج الكبسولة، والتي، بسبب شحنة السطح المتغيرة للكبسولة، تُظهر تقاربًا مختلفًا نحو الإندوكسين. في هذه الورقة، نصف بروتوكولًا بسيطًا عالميًا لتنقية مخزونات الفيروسات بغض النظر عن نوع AAV. يعتمد البروتوكول على تعريض rAAV الملوث بالإندوكسين لعلاج معتدل بالمنظف، متبوعًا بغسل متكرر لتبادل المحاليل وتركز المخزون الفيروسي بواسطة الطرد المركزي منخفض السرعة. تم استخدام عدة اختبارات لاختبار التكافؤ الفيزيائي والبيولوجي للمخزونات الفيروسية قبل وبعد التنقية. تم استخدام البروتوكول الموصوف بشكل روتيني لتنقية مخزونات الفيروسات الملوثة بمستويات تصل إلى أكثر من 1,000 وحدة إندوكسين (EU)/مل، لإنتاج ناقلات فيروسية بمستويات غير قابلة للاكتشاف عمليًا من الإندوكسين (<2.5 EU/مل)، مع استعادة التركيز في نطاق 50%-100%.