تطوير وتمييز خط خلوي إنساني للأوستيوبلasts الخلقية المتحورة بشكل مشروط

نحن نبلغ عن إنشاء خط خلوي للأوستيوبلasts الخلقية البشرية مستمد من خزعات تم الحصول عليها من إجهاض تلقائي. تم نقل الخلايا المستزرعة الأولية المعزولة من الأنسجة الجنينية بجين مشفر لطفرة حساسة لدرجات الحرارة (tsA58) لمستضد SV40 الكبير إلى جانب جين مشفر لمقاومة النيوميسين (G418). تم فحص مستعمرات مقاومة النيوميسين الفردية من خلال صبغة محددة للفوسفاتاز القلوي (AP). تم فحص النسخة التي لديها أعلى مستوى من AP، hFOB 1.19، بمزيد من العناية بالنسبة لعلامات فينوتيبية أخرى للأوستيوبلasts. أدت زراعة خلايا hFOB عند درجة الحرارة المسموح بها (33.5 درجة مئوية) إلى انقسام الخلايا بسرعة، في حين حدث القليل أو لا يحدث أي انقسام في درجة الحرارة المقيّدة (39.5 درجة مئوية). زاد كل من نشاط الفوسفاتاز القلوي وإفراز الأوستيوكالسين (OC) بطريقة تعتمد على الجرعة بعد معالجة 1،25-D3 (فيتامين D3 ثنائي الهيدروكسي) عند زراعتها في أي من درجات الحرارة. ومع ذلك، كانت مستويات الفوسفاتاز القلوي ومستويات الأوستيوكالسين المحفزة بواسطة 1،25-D3 مرتفعة في خلايا hFOB المدمجة المزروعة عند 39.5 درجة مئوية مقارنة بـ 33.5 درجة مئوية. أدت معالجة خلايا hFOB بهرمون الغدة الجاردرقية 1-34 (PTH) إلى ارتفاع مستويات cAMP. عند الوصول إلى الازدحام، مرت زراعة hFOB بعملية تمايز مبرمجة وشكلت عقيدات معدنية كما لوحظ من خلال صبغة فون كوسا. علاوة على ذلك، أظهرت صبغة المناعة على خلايا hFOB التي مرت بمرحلة تمايز متقدمة بعد أن أصبحت مزدحمة، أن مستويات عالية من الأوستيو بونتين، والأوستيونكتين، وبروتين السائل العظمي، وكولاجين النوع الأول قد تم التعبير عنها. لذلك، يوفر خط الخلايا النسلي hFOB 1.19 نظام نموذج متجانس، سريع التكاثر لدراسة بعض مراحل تمايز الأوستيوبلasts البشرية.