العزل السريع لمؤشرات حيوية من الخلايا البولية باستخدام مركز تصفية نانوية

تُطرح الخلايا البولية من جميع أجزاء النبيبات الكلوية ويمكن أن تعمل كمؤشرات حيوية لتصنيف أمراض الكلى. يحتوي عزل الخلايا البولية بواسطة طريقة الطرد المركزي التقليدية على بعض القيود للاستخدام في المختبرات السريرية. بحثنا عن طريقة سريعة وبسيطة للحصول على الخلايا البولية. استخدمنا مركز تصفية نانوية متاح تجارياً لتكثيف الخلايا من البول عن طريق الطرد المركزي عند 3000 g لمدة 10-30 دقيقة. تم استرداد مؤشرات الخلايا البولية مثل جين القابلية للأورام 101، أكوا بورتين-2، إنولاز خاص بالعصبونات، أنكسين V، أنزيم تحويل أنجيوتنسين، وبودوكالكسين (PODXL) من مركز التصفية النانوية وتم الكشف عنها بواسطة تقنية Western blotting، كما وُجدت ميزات نموذجية للفصوص البولية بواسطة المجهر الإلكتروني. تم اكتشاف مؤشرات الخلايا في أقل من 0.5 مل من البول. باستخدام طريقة التصفية النانوية، يمكن استرداد بروتينات الخلايا من عينات البول المجمدة عند -80 درجة مئوية أو المبردة طوال الليل عند 4 درجات مئوية ثم تخزينها عند -80 درجة مئوية. من خلال تكثيف الخلايا، تمكنا من الكشف عن PODXL، وهو مؤشر على خلايا البودوسيت، والتي انخفضت بنسبة 71% في خمسة مرضى ذكور يعانون من تليف كبيبات مكاني مركزي وبروتين مديد. نستنتج أن 1) استخدام مركز التصفية النانوية يبسط ويسرع تكثيف الخلايا البولية؛ و 2) يمكن لمركز التصفية النانوية تركيز بروتينات الخلايا من عينات البول السريرية. قد يسرع هذه الطريقة المعززة من نقل مؤشرات الخلايا البولية من المختبر إلى السرير لتشخيص وتصنيف وتوقع أمراض الكلى.