كيناز البروتين المعتمد على الكالسيوم/كالمدولين II: تحديد مواقع الفسفرة الذاتية المسؤولة عن توليد الاستقلالية عن الكالسيوم/كالمدولين.

كيناز البروتين المعتمد على الكالسيوم/كالمدولين II يحتوي على نوعين من الوحدات الفرعية، ألفا (Mr 50,000) وبيتا (Mr 60,000/58,000)، كلاهما يخضع لعملية الفسفرة الذاتية المعتمدة على الكالسيوم/كالمدولين. من المعروف أن الفسفرة الذاتية تحول الإنزيم إلى شكل مستقل عن الكالسيوم/كالمدولين. في هذه الدراسة، قمنا بتوصيف مواقع الفسفرة الذاتية على كيناز البروتين المعتمد على الكالسيوم/كالمدولين في المخ الأمامي للفئران والتي من المرجح أن تكون مسؤولة عن توليد الاستقلالية عن الكالسيوم/كالمدولين. تحت ظروف (0 درجة مئوية، تركيزات منخفضة من ATP) كافية لتحقيق استقلالية قريبة من الحد الأقصى عن الكالسيوم/كالمدولين، أصبحت فقط بعض من المواقع القابلة للفسفرة على الإنزيم مفسفرة. تم فحص هذه المواقع باستخدام تحليل الأحماض الأمينية الفوسفورية، ورسم خرائط الفوسفوببتيد الحراري ثنائي الأبعاد، وكروماتوغرافيا السائل عالية الأداء. كان المسار الزمني لفسفرة الثريونين في كل من وحدات ألفا وبيتا مشابهًا للمسار الزمني لتوليد الاستقلالية عن الكالسيوم/كالمدولين. علاوة على ذلك، كان المسار الزمني لفسفرة مجموعة من الببتيدات، المشار إليها بالببتيد 1/1'، الموجود في كل من وحدات ألفا وبيتا مشابهًا للمسار الزمني لتوليد الاستقلالية عن الكالسيوم/كالمدولين. كانت الثريونين هي الأحماض الأمينية الوحيدة المفسفرة في الببتيد 1/1'. تم فسفرة ببتيد إضافي، المشار إليه بالببتيد 2، في الوحدة الفرعية بيتا. لم يتوازى المسار الزمني لفسفرة الببتيد 2، الذي احتوى أيضًا فقط على الفوسفوثيرونين، مع المسار الزمني لتوليد الاستقلالية عن الكالسيوم/كالمدولين. من المحتمل أن تكون فسفرة بقايا ثريونين في الببتيد 1/1' مسؤولة عن توليد الاستقلالية عن الكالسيوم/كالمدولين لكيناز البروتين المعتمد على الكالسيوم/كالمدولين II.