Cas12i2 ingénieré est une plateforme polyvalente et à haute efficacité pour l’édition génomique thérapeutique

Le CRISPR-Cas de type V-I est une famille de systèmes de nucléases programmables contenant Cas12i, guidés par un court crRNA sans exigence pour un tracrRNA. Ici, nous présentons un système CRISPR de type V-I ingénieré (Cas12i), ABR-001, qui utilise un ARN guide sans tracr. L'effecteur Cas12i compact est capable de s'auto-traiter de pré-crRNA et de cliver des cibles dsDNA, ce qui facilite des options de livraison polyvalentes et le multiplexage, respectivement. Nous appliquons une approche de scan mutationnel non biaisé pour améliorer l'activité d'édition initialement faible de Cas12i2. La variante ingénierée, ABR-001, présente une large capacité d’édition du génome dans des lignées cellulaires humaines, des cellules T primaires et des cellules souches hématopoïétiques et progénitrices CD34+, avec à la fois une efficacité robuste et une haute spécificité. De plus, ABR-001 atteint un niveau élevé d’édition du génome lorsqu'il est délivré par vecteur AAV aux cellules HEK293T. Ce travail établit ABR-001 comme une plateforme polyvalente, spécifique et haute performance pour la thérapie génique ex vivo et in vivo.