ارتباط Src بـ Na+/K+-ATPase يشكل مركب إشارة وظيفي

لقد أظهرنا أن الأوايبين ينشط Src، مما يؤدي إلى فسفرة تيروزين لاحقة للعديد من المؤشرات. هنا، اختبرنا ما إذا كان Na+/K+-ATPase وSrc يمكن أن يشكلا مركب إشارة وظيفي. في خلايا LLC-PK1، تم تحديد Na+/K+-ATPase وSrc في الغلاف البلازمي. أشار تحليل نقل الطاقة الضوئي إلى أن كلا البروتينين كانا قريبين من بعضهما البعض، مما يشير إلى وجود تفاعل مباشر. أظهر اختبار سحب GST تفاعلًا مباشرًا ومنظمًا بواسطة الأوايبين وتفاعلًا متعدد المواقع بين وحدة 1 من Na+/K+-ATPase وSrc. على الرغم من أن التفاعل بين مجال كيناز Src ومجال السيتوسول الثالث (CD3) من 1 يتم تنظيمه بواسطة الأوايبين، فإن مجال Src SH3SH2 يرتبط بشكل ثابت بالمجال السيتوسولي الثاني. وظيفيًا، أدى ارتباط Src مع إما Na+/K+-ATPase أو GST-CD3 إلى تثبيط نشاط Src. أدت إضافة الأوايبين، وليس الفانادات، إلى مركب Na+/K+-ATPase/Src المنقى إلى تحرير مجال الكيناز واستعادة نشاط Src. بشكل متسق، فإن تعرض خلايا سليمة للأوايبين زاد على ما يبدو من المسافة بين Na+/K+-ATPase وSrc. بشكل متزامن، عزز أيضًا فسفرة التيروزين للبروتينات المرتبطة بـ Na+/K+-ATPase. توضح هذه النتائج الجديدة آلية جزيئية جديدة لنقل الإشارة تتضمن تفاعل ATPase من النوع P وكيناز تيروزين غير مستقبل.