Src가 Na+/K+-ATPase에 결합하여 기능적 신호 복합체를 형성합니다.

우리는 오우바인이 Src를 활성화하여 여러 효과자의 티로신 인산화로 이어진다는 것을 보여주었습니다. 여기에서 우리는 Na+/K+-ATPase와 Src가 기능적 신호 복합체를 형성할 수 있는지 테스트했습니다. LLC-PK1 세포에서 Na+/K+-ATPase와 Src는 세포막에서 공존했습니다. 형광 공명 에너지 전달 분석 결과 두 단백질이 가까이에 위치해 있어 직접적 상호작용을 시사했습니다. GST 풀다운 분석은 Na+/K+-ATPase의 1a 소단위체와 Src 사이의 직접적이고 오우바인에 의해 조절되며 다초점 상호작용을 보여주었습니다. Src 키나제 도메인과 1a의 세 번째 세포질 도메인(CD3) 사이의 상호작용은 오우바인에 의해 규제되지만, Src SH3SH2 도메인은 두 번째 세포질 도메인에 지속적으로 결합합니다. 기능적으로 Src가 Na+/K+-ATPase 또는 GST-CD3에 결합하는 것은 Src 활성을 억제했습니다. 정제된 Na+/K+-ATPase/Src 복합체에 오우바인을 추가했을 때, 반면 바나데이트는 그렇지 않은 경우 키나제 도메인이 풀려나고 Src 활성이 회복되었습니다. 일관되게, 완전한 세포를 오우바인에 노출시키면 Na+/K+-ATPase와 Src 사이의 거리가 증가한 것으로 보였습니다. 동시에 Na+/K+-ATPase와 연관된 단백질의 티로신 인산화도 자극했습니다. 이러한 새로운 발견은 P형 ATPase와 비수용체 티로신 키나제의 상호작용을 포함한 신호 전송의 새로운 분자 메커니즘을 보여줍니다.