الارتباط والدخول للغلاف البروتيني لفيروس نورواك المؤتلف إلى خطوط الخلايا البشرية والحيوانية المزروعة

فيروس نورواك (NV) هو السلالة النموذجية لمجموعة من الفيروسات الكاليسيفيرية البشرية غير القابلة للنمو المسؤولة عن تفشي الأوبئة من التهاب المعدة والأمعاء الحاد. في حين أن هذه الفيروسات لا تنمو في خلايا زراعة الأنسجة أو النماذج الحيوانية، فإن التعبير عن بروتين الغلاف في خلايا الحشرات يؤدي إلى التجميع الذاتي للجزيئات الشبيهة بفيروس نورواك المؤتلف (rNV VLPs) التي تشبه شكلياً ومناعيًا الفيروس الأصلي. لقد استخدمنا هذه الجسيمات لدراسة تفاعلات الفيروس مع الخلايا. تمت دراسة الربط والتمثيل الخلوي للجزيئات في خلايا البشر والحيوانات المزروعة في محاولة لتحديد خطوط الخلايا القابلة للاشتباه المحتمل لانتشار الفيروس في المختبر وتحديد ما إذا كانت الأحداث المبكرة في دورة التكاثر مسؤولة عن نطاق المضيف الضيق وتقييد نمو الفيروس في زراعة الخلايا. ربطت الجزيئات المشعة بشكل محدد بعدد قابل للتشبع من الجزيئات المربوطة على سطح الخلية من 13 خطًا خلويًا من أصول مختلفة، بما في ذلك الأمعاء البشرية (Caco-2 المتمايزة وغير المتمايزة) والمبيض الحشري (Spodoptera frugiperda 9). قامت خلايا Caco-2 المتمايزة بربط جزيئات rNV VLP أكثر بشكل ملحوظ من الخطوط الخلوية الأخرى. لم تتوافق التباينات في كمية الجزيئات المربوطة بين خطوط الخلايا المختلفة مع الأنسجة أو الأنواع الأصلية. كان ربط الجزيئات محددًا، كما تم تحديده من خلال تجارب المنافسة مع جزيئات rNV VLP غير المشعة؛ ومع ذلك، فإن 1.4 إلى 6.8% فقط من الجزيئات المشعة المربوطة مسبقًا دخلت إلى الخلايا. تم إجراء تجارب الحجب باستخدام مصل من مضادات ربوبي rNV متعددة الأضلاع و monoclonal ومصل مضاد بيبتيد محدد لرسم خرائط المجالات على jNV VLPs المعنية بالربط مع الخلايا. لقد حجب جسم مضاد وحيد النسيلة (NV8812) ربط جزيئات rNV VLP مع خطوط خلايا البشر والحيوانات. تم تحديد موقع موقع الربط لجسم مضاد وحيد النسيلة NV8812 على نهاية C-terminal من 300 إلى 384 من بقايا بروتين الغلاف من خلال الترسيب المناعي مع الأشكال المشقوقة والإضافية من بروتين الغلاف. تشير هذه البيانات إلى أن المنطقة C-terminal من بروتين الغلاف معنية في الربط المحدد لجزيئات rNV VLP مع الخلايا.