Unión y entrada de cápsides del virus Norwalk recombinante en líneas celulares humanas y animales cultivadas

El virus Norwalk (NV) es la cepa prototipo de un grupo de calicivirus humanos no cultivables responsables de brotes epidémicos de gastroenteritis aguda. Aunque estos virus no crecen en cultivos de células de tejidos o modelos animales, la expresión de la proteína de la cápside en células de insectos da como resultado el autoensamblaje de partículas similares a virus Norwalk recombinantes (rNV VLPs) que son morfológica y antigénicamente similares al NV nativo. Hemos utilizado estas rNV VLPs para examinar las interacciones virus-célula. Se estudiaron la unión y la internalización de VLPs en líneas celulares humanas y animales cultivadas en un intento de identificar líneas celulares potencialmente susceptibles para la propagación del virus in vitro y determinar si los eventos tempranos en el ciclo de replicación eran responsables del rango estrecho del hospedador y la restricción del crecimiento del virus en el cultivo celular. Las VLPs radiomarcadas se unieron específicamente a un número saturable de moléculas de unión en la superficie celular de 13 líneas celulares de diferentes orígenes, incluyendo el intestino humano (Caco-2 diferenciadas y no diferenciadas) y el ovario de insecto (Spodoptera frugiperda 9). Las células Caco-2 diferenciadas unieron significativamente más rNV VLPs que las otras líneas celulares. Las variaciones en la cantidad de VLPs unidas entre las diferentes líneas celulares no se correlacionaron con el tejido o especie de origen. La unión de VLP fue específica, como se determinó por experimentos de competencia con rNV VLPs no marcadas; sin embargo, solo el 1.4 al 6.8% de las VLPs radiomarcadas específicamente preunidas se internalizaron en las células. Se realizaron experimentos de bloqueo utilizando sueros anti-rNV policlonales y monoclonales, así como sueros anti-péptidos específicos para mapear los dominios en las rNV VLPs involucrados en la unión a las células. Un anticuerpo monoclonal (NV8812) bloqueó la unión de rNV VLPs a líneas celulares humanas y animales. El sitio de unión del anticuerpo monoclonal NV8812 fue localizado en los residuos C-terminales de 300 a 384 de la proteína de la cápside mediante inmunoprecipitación con formas truncadas y cortadas de la proteína de la cápside. Estos datos sugieren que la región C-terminal de la proteína de la cápside está involucrada en la unión específica de rNV VLPs a las células.