Detección de APE1 sin etiquetas y ultrasensible basada en una reacción en cadena de hibridación combinada con G-cuádruplex

La endonucleasa apurínica/apirimidinica 1 (APE1) cleava selectivamente el sitio apurínico/apirimidínico (sitio AP) en el ADN, desempeñando un papel crítico en la reparación por escisión de bases y el mantenimiento de la estabilidad genómica. La expresión aberrante de APE1 se ha relacionado con numerosas enfermedades, incluidos trastornos cardiovasculares, condiciones neurológicas y varios tipos de cáncer. Sin embargo, los métodos existentes para detectar niveles traza de APE1 siguen siendo subóptimos para ciertas aplicaciones. Para abordar esta limitación, desarrollamos una plataforma de biosensado innovadora para la detección ultrasensible de APE1 mediante la integración del reconocimiento específico del sitio APE1 con la amplificación de señal basada en reacción en cadena de hibridación (HCR), lo que permite bioensayos sin enzimas y sin etiquetas. En este sistema, APE1 reconoce y cleava la sonda en horquilla (HP) que contiene el sitio AP, liberando un iniciador de HCR de cadena simple que activa la amplificación en cascada de HCR. Debido a la alta eficiencia de HCR, este método logra una sensibilidad ultra alta, con un límite de detección calculado de 1.0 × 10−8 U/mL. Además, el biosensor demuestra un rendimiento robusto en lisados celulares y es aplicable para la detección y evaluación de inhibidores de APE1.