El infarto de miocardio crea una ventana crítica de tiempo para la terapia génica con AAV

Resumen El virus adenoasociado recombinante (AAV) es un vector principal de entrega de genes para la terapia génica cardíaca. Los factores que influyen en la transferencia genética cardíaca basada en AAV siguen sin entenderse completamente. Este estudio mostró que el infarto de miocardio (IM) mejoró la transducción y la expresión génica cardíaca de AAV en ratones tras la administración sistémica, alcanzando su punto máximo en el tercer día después del IM. Estos vectores AAV adicionales se enriquecieron en la región infartada, correlacionándose con la permeabilización patológica de los vasos coronarios. El resultado de la terapia génica basada en AAV para el IM, a través de la edición de base de Camk2d, mejoró significativamente cuando se inyectó AAV en el tercer día post-IM. En conjunto, nuestros hallazgos descubrieron una ventana terapéutica crítica después del IM que facilitó la transferencia genética cardíaca basada en AAV, que podría aprovecharse para impulsar tanto la cardiología básica como la traslacional. Métodos Se sometieron a ratones adultos C57BL/6 a la ligadura de la arteria coronaria descendente anterior izquierda (LAD). La ligadura permanente de la LAD creó el modelo de IM, mientras que la ligadura de 30 minutos seguida de reperfusión estableció el modelo de isquemia/reperfusión (I/R). Se inyectaron 2×10^11 vectores AAV en los ratones a través de la vena central. Los vectores AAV transportaban transgenes que se activaron mediante el promotor específico de cardiomiocitos Tnnt2 o el promotor CMV constitutivamente activo. AAV expresó luciferasa con la etiqueta de hemaglutinina (HA). La cantidad de vectores AAV se cuantificó mediante el análisis de PCR cuantitativa en tiempo real (RT-qPCR) del ADN genómico. La expresión del transgen se midió mediante RT-qPCR a nivel de ARNm o imágenes de inmunofluorescencia de la etiqueta HA y western blot a nivel de proteína. La actividad de la luciferasa se midió a través de imágenes de bioluminiscencia.