Citoquimetría de flujo con autofluorescencia por tiempo de vida y conteo de fotones individuales correlacionado en el tiempo

La microscopía de imagen de tiempo de vida de autofluorescencia (FLIM) es sensible a cambios metabólicos en células individuales basados en cambios en las actividades de unión a proteínas de los coenzimas metabólicos NAD(P)H. Sin embargo, FLIM normalmente depende de electrónica de detección de conteo de fotones individuales correlacionados en el tiempo (TCSPC) en microscopios de exploración con láser, que son costosos, de bajo rendimiento y requieren un tiempo de post-procesamiento considerable para la segmentación y análisis celular. Aquí, presentamos un citómetro de flujo sensible al tiempo de vida de fluorescencia que ofrece la misma resolución temporal TCSPC en una geometría de flujo, con fuentes de excitación de fotones individuales de bajo costo, un rendimiento de decenas de células por segundo y análisis de células individuales en tiempo real. El sistema utiliza un láser de diodo pulsado en picosegundos de 375nm que opera a 50MHz, tubos fotomultiplicadores de fotones alcalinos, un etiquetador de tiempo basado en FPGA y puede proporcionar clasificación basada en fasores en tiempo real.