Asegurar la autenticidad halal en productos tradicionales a base de piel de bovino, como el Krecek (rambakcracker en Gudeg), es un desafío debido a la similitud visual entre la piel de bovino y la piel porcina y la grave degradación del ADN causada por el procesamiento intensivo (fritura y ebullición en leche de coco) de estos productos. Este estudio desarrolló y validó un ensayo de qPCR Duplex SYBR Green dirigido al gen mitocondrial ND4L específico de porcino y el gen de ARNr 18S eucariota como control de amplificación interna (IAC). La optimización de las concentraciones de cebadores reveló que una proporción de 2:1 (ND4L:18S rRNA) proporcionaba la amplificación más equilibrada de los genes objetivo. El ensayo demostró alta especificidad, distinguiendo el objetivo porcino del IAC por temperaturas de fusión distintas (Tm): ND4L a 78.0°C y ARNr 18S a 85.0°C. El método fue validado con un límite de detección (LOD) de 500 pg/μL, un CV de 0.60%, y especificidad frente a 18 especies no objetivo. Un análisis de 42 muestras comerciales de Krecek (etiquetadas como carne de res) recolectadas de vendedores tradicionales de Gudeg en Yogyakarta no mostró picos de fusión específicos de porcino. Se detectó el pico de fusión del 100% del IAC (Tm 85.0°C) en todas las muestras, confirmando la recuperación exitosa de ADN amplificable a pesar de la compleja matriz de muestra. Estos resultados confirman la ausencia de adulteración porcina en los productos encuestados y establecen el qPCR Duplex propuesto como una herramienta robusta para la verificación rutinaria halal de productos alimentarios altamente procesados y con alto contenido de grasa.
Volkandari et al. (Sat,) estudiaron esta cuestión.