Los editores de bases ortogonales y controlables externamente son críticos para la manipulación segura de nucleótidos individuales en vivo. Aquí, identificamos inhibidores de deaminasa en miniatura (~140-aa) (Sddis) que se unen a deaminasas de ADN de cadena simple (Sdds) de alta afinidad y especificidad, obstruyendo sus superficies de unión al ADN para inhibir completamente la actividad de C a T. Con base en estos inhibidores, diseñamos un sistema de transformación regulado por edición de bases de adenina y citosina (ACBE-RTS). Esta plataforma presenta dos Sdds inactivas fusionadas a nCas9 como brazos de acoplamiento, con módulos efectores proporcionados por SviSddi-SflSdd (CBE) inducible por doxiciclina y fusiones de Air1Sddi-ABE8e (ABE) inducibles por cumato. La regulación por pequeñas moléculas permite cambiar entre cuatro modos (APAGADO, CBE, ABE, ACBE), logrando hasta un 43.4% de edición de C a T o un 42.9% de A a G en cuatro sitios humanos endógenos. Usando una biblioteca de sgRNA de 4000 miembros en células MARC-145 que expresan de manera estable ACBE-RTS, un tamizaje de tres rondas identificó cuatro aminoácidos clave en el CD163 de mono que redujo la replicación del PRRSV altamente patogénico en más de 100 veces y eliminó la tinción detectable de antígeno viral. Compacto y de modo múltiple conmutado en un solo andamio de Cas9, ACBE-RTS establece un marco versátil para terapias de precisión e interrogación genética. Su interfaz modular Sddi-Sdd podría, en principio, extenderse fácilmente a otros editores de bases, como editores de base de timina y guanina (TBE y GBE).
Deng et al. (Jue,) estudiaron esta cuestión.