ATP es necesario para la endocitosis mediada por receptores en células intactas.

Hemos demostrado la necesidad de ATP celular en la endocitosis mediada por receptores de transferrina. Esto se ha logrado utilizando un ensayo novedoso para la endocitosis basado en la adquisición de resistencia al agente reductor impermeable a la membrana, glutatión (GSH). La transferrina diférrica se conjugó a biotina a través de un enlace disulfuro escindible y se yodó. La internalización de 125I-biotina-S-S-transferrina (125I-BSST) se cuantificó mediante adsorción a avidina-Sepharosa después del tratamiento de las células con GSH. La endocitosis mediada por receptores de 125I-BSST se inhibió severamente en células desprovistas de ATP. Se obtuvieron resultados similares cuando se agotó ATP por incubación de células bajo una atmósfera de N2 o en presencia de NaN3 y NaF. Este último tratamiento, por sí solo, también resultó en una pérdida de receptores de transferrina en la superficie que no se pudo correlacionar con reducciones en ATP celular. En contraste con la adquisición de resistencia al GSH, la aparente internalización de 125I-BSST, evaluada por la inaccesibilidad a anticuerpos anti-transferrina, alcanzó niveles de control en células desprovistas de ATP. Nuestros datos bioquímicos y morfológicos sugirieron que, aunque el ATP es necesario para la endocitosis mediada por receptores, en células desprovistas de ATP, los ligandos pueden quedar secuestrados eficientemente en fosetas profundamente invaginadas que son inaccesibles a sondas grandes como anticuerpos, pero siguen siendo accesibles a moléculas pequeñas como GSH.