Clonación Golden Gate

Los métodos de ensamblaje de ADN son herramientas esenciales para la investigación biológica y la biotecnología. Por lo tanto, se han desarrollado varios métodos para clonar fragmentos de ADN de interés. Los métodos convencionales generalmente requieren varios pasos de clonación para generar un constructo de interés. En cada paso, un único fragmento de ADN se transfiere de un plásmido donante o producto de PCR a un vector receptor. En los últimos años, se han desarrollado varios métodos para facilitar y acelerar este proceso. Uno de estos métodos, la clonación Golden Gate, permite ensamblar hasta nueve fragmentos a la vez en un plásmido receptor. La clonación se realiza pipeteando en un solo tubo todos los plásmidos donantes, el vector receptor, una enzima de restricción tipo IIS y ligasa, e incubando la mezcla en un termociclador. A pesar de la simplicidad del procedimiento de clonación, la mayoría de los clones obtenidos después de la transformación contienen el constructo esperado. Sin embargo, el uso de la clonación Golden Gate requiere el uso de plásmidos donantes y receptores cuidadosamente diseñados. Aquí proporcionamos un protocolo que describe cómo diseñar estos plásmidos y también describimos las condiciones necesarias para realizar la reacción de ensamblaje.