Interacción específica de la DNA polimerasa β y la DNA ligasa I en un complejo multiproteico de reparación por escisión de bases del testículo bovino

La reparación por escisión de bases (BER) es un mecanismo de defensa celular que repara bases modificadas en el ADN. Recientemente, se ha reconstituido una reacción de reparación G:U con varias enzimas purificadas de Escherichia coli (Dianov, G., y Lindahl, T.(1994) Curr. Biol. 4, 1069-1076). Usando extracto nuclear crudo de testículo bovino, hemos demostrado que G:U se repara de manera eficiente in vitro, y que la DNA polimerasa beta (beta-pol) es responsable de la síntesis de llenado de huecos de nucleótidos individuales (Singhal, R. K., Prasad, R., y Wilson, S. H.(1995) J. Biol. Chem. 270, 949-957). Para investigar la posible interacción de beta-pol con otras proteínas de BER, desarrollamos matrices de cromatografía de afinidad mediante el entrelazado de beta-pol purificada de rata o anticuerpos contra beta-pol a soportes sólidos. Se aplicó extracto nuclear crudo de testículo bovino a estas columnas de afinidad, que luego fueron lavadas extensamente. Las proteínas que se unieron específicamente a las columnas de afinidad fueron co-eluidas en un complejo con beta-pol. Este complejo tenía una masa molecular de aproximadamente 180 kDa y fue capaz de llevar a cabo la reacción completa de BER iniciada por uracilo. El complejo de BER contenía tanto beta-pol como DNA ligasa I. Un anticuerpo contra beta-pol pudo desplazar el complejo en gradientes de sacarosa a una masa molecular mucho mayor (>300 kDa) que nuevamente contenía tanto beta-pol como DNA ligasa I. Además, la DNA ligasa I y beta-pol fueron co-inmunoprecipitadas del extracto nuclear del testículo con IgG anti beta-pol. Así, concluimos que beta-pol y la DNA ligasa I son componentes de un complejo multiproteico que realiza BER.