Comparación de métodos de aislamiento de exosomas y ARN exosomal del medio de cultivo celular y suero

Los exosomas son vesículas derivadas de células y son abundantes en fluidos biológicos; contienen moléculas de ARN que pueden servir como biomarcadores diagnósticos potenciales en 'medicina de precisión'. Para promover la aplicación clínica del ARN exosomal (exoARN), se deben comparar y validar muchos métodos de aislamiento. Los exosomas en el medio de cultivo celular (MCC) y suero pueden ser aislados usando ultracentrifugación (UC), ExoQuick o Total Exosome Isolation Reagent (TEI), y el exoARN puede ser extraído usando TRIzol-LS, SeraMir, Total Exosome RNA Isolation (TER), HiPure Liquid RNA/miRNA kit (HLR), miRNeasy o exoRNeasy. El exoARN fue evaluado utilizando NanoDrop, Bioanalyzer 2100, reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa y secuenciación de alto rendimiento. La UC mostró la menor recuperación de partículas, pero la más alta pureza de proteínas para el aislamiento de exosomas. Para el aislamiento de exoARN, encontramos que combinaciones de los métodos TEI y TER resultaron en alta eficiencia de extracción y pureza de ARN pequeños obtenidos usando MCC. Se mostró un alto rendimiento y un patrón de distribución de tamaño estrecho de ARN pequeños en exoARN aislado por exoRNeasy del suero. En el análisis del perfil de ARN, la proporción de constituyentes de ARN pequeños, el contenido de miARN y la cantidad variaron como resultado de diferencias metodológicas. Este estudio mostró que diferentes métodos pueden introducir variaciones en la concentración, pureza y tamaño de los exosomas y exoARN. Aquí discutimos las ventajas y desventajas de cada método y su aplicación a diferentes materiales, proporcionando así una referencia de acuerdo con el diseño de la investigación.