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Los ensayos de neutralización por pseudotipo son herramientas poderosas para estudiar las respuestas de anticuerpos funcionales contra virus en laboratorios de baja bioseguridad. Sin embargo, los protocolos descritos en la literatura difieren ampliamente en cuanto a material, reactivos y métodos utilizados para realizar estos ensayos y para analizar los datos brutos generados. Esto podría resultar en discrepancias entre los resultados de diferentes laboratorios, incluso cuando se analizan los mismos pseudotipos y las mismas muestras. Aquí, describimos, en detalle, un protocolo experimental para realizar ensayos de neutralización por pseudotipo utilizando pseudotipos lentivirales portadores de hemaglutinina de influenza y expresando luciferasa de luciérnaga. También presentamos los pasos necesarios para analizar los datos y calcular la concentración inhibitoria media máxima de los sueros analizados. Este protocolo proporcionará apoyo para la validación y la estandarización del ensayo de neutralización por pseudotipo para la serología del virus de la influenza. Adicionalmente, proporcionará un punto de partida para el desarrollo de ensayos de neutralización por pseudotipo utilizando pseudotipos que porten otras proteínas de envoltura viral.
Ferrara et al. (Mon,) estudiaron esta cuestión.