Determinación del contenido de proteínas en muestras complejas mediante análisis de aminoácidos aromáticos, cromatografía líquida-absorción UV y colorimetría

La determinación rápida y precisa del contenido de proteínas de una muestra es una tarea importante y no trivial en muchas actividades de investigación bioquímica, biomédica, química de alimentos, farmacéutica y ambiental. Se utilizan diferentes métodos de determinación total de proteínas para una amplia gama de proteínas con propiedades altamente variables en matrices complejas. Estos métodos suelen funcionar razonablemente bien para proteínas en condiciones controladas, pero los resultados para muestras no estándar y complejas son a menudo cuestionables. Aquí, comparamos métodos nuevos y bien establecidos, incluidos el análisis tradicional de aminoácidos (AAA), el análisis de aminoácidos aromáticos (AAAA) basado en los aminoácidos fenilalanina y tirosina, la cromatografía líquida en fase reversa de proteínas intactas con mediciones de absorción UV a 220 y 280 nm (LC-220, LC-280), y ensayos colorimétricos como el ensayo de unión del colorante Coomassie Blue G-250 (Bradford) y el ensayo de ácido bicinchonínico (BCA). Investigamos diferentes muestras, incluidas proteínas con propiedades desafiantes, modificaciones químicas, mezclas y matrices complejas como material particulado en el aire y extractos de polen. Todos los métodos proporcionaron resultados precisos y exactos para la proteína y la matriz utilizadas para la calibración. AAA, AAAA con detección por fluorescencia y el método LC-220 produjeron resultados robustos incluso en condiciones más desafiantes (analytes y matrices variables). Estos métodos resultaron ser muy adecuados para la determinación fiable del contenido de proteínas en una amplia gama de muestras, como material particulado en el aire y polen.