Un método optimizado y validado para la aislamiento y caracterización de linfocitos a partir de biopsias intestinales humanas HIV+.

El tracto gastrointestinal (GI) alberga la mayoría de las células inmunitarias del cuerpo y también es un importante reservorio de VIH en pacientes tratados con ART. Para lograr una cura, la mayoría de las células infectadas por VIH deben ser identificadas y eliminadas. Si bien obtener biopsias intestinales es un método relativamente no invasivo para muestrear tejido relevante para monitorear la actividad del VIH, la isolación de células inmunitarias de estas muestras de tejido limitadas ha demostrado ser un desafío. Se requiere digestión enzimática del tejido para una máxima isolamento de células inmunitarias de biopsias intestinales. Sin embargo, estas digestiones enzimáticas también pueden ser perjudiciales para la preservación de marcadores de superficie celular que son requeridos para una identificación precisa de varios subconjuntos de leucocitos. En este estudio, describimos un protocolo optimizado para la aislamiento de linfocitos de biopsias intestinales humanas. También discutimos nuestros resultados de validación, que muestran que en comparación con varias otras preparaciones de colagenasa, el uso de CSLPA mantiene alta recuperación de linfocitos mientras preserva la integridad de la mayoría de los antígenos de superficie celular que probamos. Importante, los receptores de quimiocinas que se utilizan para caracterizar varios subconjuntos de células T, que son notorios por ser digeridos durante una digestión enzimática típica del tejido, se preservan altamente utilizando este protocolo.