Detección de transcritos de ARN de proteína antisentido (ASP) en individuos infectados con el virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1)

La detección de ARN antisentido se ve obstaculizada por el inicio no específico de la transcripción reversa (RT), debido a la capacidad de las estructuras secundarias del ARN para iniciar la RT en ausencia de iniciadores específicos. La detección de ARN antisentido mediante la RT-PCR convencional no permite evaluar la polaridad del molde de ARN inicial, lo que provoca la amplificación de cDNAs no específicos. En este estudio, hemos desarrollado un protocolo modificado para la detección del ARN de proteína antisentido (ASP) del virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1). Usando este enfoque, hemos identificado transcritos de ASP en células T CD4+ aisladas de cinco individuos infectados por VIH, ya sea sin tratamiento o bajo terapia supresiva. Mostramos que el ARN de ASP puede ser detectado en células T CD4+ estimuladas de ambos grupos de pacientes, pero no en células no estimuladas. También mostramos que en pacientes no tratados, los patrones de expresión de ASP y env son muy similares, siendo los niveles de ARN de ASP marcadamente inferiores a los de env. El tratamiento de células de un paciente virémico con α-amanitina reduce significativamente la tasa de síntesis de ARN de ASP, sugiriendo que está asociado con la RNA polimerasa II, la enzima central en la transcripción de genes codificadores de proteínas. Nuestros datos representan las primeras secuencias nucleotídicas obtenidas en pacientes para ASP, demostrando que su transcripción ocurre efectivamente en aquellas linajes de VIH-1 en las que está presente el marco de lectura abierto de ASP.