Síntesis de Cascada Multienzimática de Haptens Oligosacáridos a Partir de Polisacáridos Capsulares de Streptococcus suis Serotipo 2 y 1/2 y Evaluación de Antigenicidad

Streptococcus suis es un patógeno zoonótico distribuido globalmente que representa una amenaza seria tanto para la ganadería como para la salud pública humana, siendo los serotipos 2 y 1/2 las variantes patogénicas principales. Las vacunas basadas en polisacáridos capsulares (CPS) representan una estrategia preventiva y de control prometedora contra infecciones por S. suis; sin embargo, el progreso en esta área sigue siendo relativamente limitado. En este estudio, se expresaron y purificaron con éxito, en condiciones in vitro optimizadas, seis glicosiltransferasas clave─Cps2G, Cps2H, Cps2J, Cps2K, Cps1/2K y Cps2N─involucradas en la biosíntesis de las unidades repetitivas del heptasacárido CPS de los serotipos 2 y 1/2 de S. suis. Sus funciones catalíticas, propiedades bioquímicas y especificidades de sustrato fueron caracterizadas sistemáticamente. Utilizando estas enzimas recombinantes, implementamos un enfoque de síntesis multienzimática en un solo recipiente (OPME) para producir de manera eficiente 13 derivados oligosacáridos relacionados con las unidades repetitivas del heptasacárido, incluyendo tanto formas α-galactosiladas como no galactosiladas, con altos rendimientos. Estos haptens oligosacáridos fueron posteriormente conjugados a la albúmina sérica bovina a través de un enlace químico para generar antígenos de recubrimiento para la evaluación de antigenicidad. Los resultados revelaron que el pentasacárido 5c, que carece tanto del residuo terminal de ácido siálico como de la rama α-galactosa pero conserva la mayoría de la estructura nativa del esqueleto CPS, mostró la mayor afinidad de unión hacia el suero de ratones y conejos positivos para S. suis. Este estudio establece una plataforma enzimática in vitro eficiente como una alternativa viable a la síntesis química y extracción tradicionales para acceder a haptens oligosacáridos derivados de CPS, lo que permite la identificación de epítopos inmunorreactivos prometedores para el diseño de vacunas anti-S. suis.