Optimización del ensayo de Alizarina Roja S mediante la mejora de la mineralización de osteoblastos

El ensayo de alizarina roja S se considera el estándar de oro para la cuantificación de la mineralización de osteoblastos y, por lo tanto, es ampliamente utilizado entre los científicos. Sin embargo, existen varias restricciones para este método, p. ej., la sensibilidad moderada dificulta descubrir efectos leves pero significativos de sustancias potencialmente relevantes clínicamente. Por lo tanto, una adaptación del método de tinción es apropiada y puede obtenerse aumentando la capacidad de mineralización de los osteoblastos. En este estudio, se realizaron experimentos de cultivo celular con osteoblastos humanos (SaOs-2) y murinos (MC3T3-E1) bajo la adición de concentraciones crecientes de cloruro de calcio (1, 2.5, 5 y 10 mM) o calcitonina (1, 2.5, 5 y 10 nM). Después de tres o cuatro semanas, la matriz de mineralización se tiñó con alizarina roja S y la concentración se cuantificó fotométricamente. Solo el cloruro de calcio pudo aumentar significativamente la mineralización, y por lo tanto aumentó la sensibilidad de la tinción con alizarina roja S de forma dependiente de la dosis, tanto en ambas líneas celulares osteoblásticas como independientemente del área de superficie del pozo de cultivo celular. Esta optimización, que es económica y eficiente en tiempo, permite un análisis más sensible de sustancias potencialmente relevantes clínicamente en futuras investigaciones óseas.