Células T CAR editadas por base para terapia combinada contra malignidades de células T

El objetivo de las malignidades de células T utilizando células T con receptores de antígenos quiméricos (CAR) se ve obstaculizado por el fratricidio 'T v T' contra antígenos compartidos como CD3 y CD7. La edición de base ofrece la posibilidad de interrumpir sin problemas la expresión génica de antígenos problemáticos a través de la creación de codones de parada o la eliminación de sitios de empalme. Describimos la generación de células T resistentes al fratricidio mediante la eliminación ordenada de TCR/CD3 y CD7 antes de la expresión mediada por lentivirus de CAR específicos para CD3 o CD7. La investigación molecular de las células editadas por base confirmó la eliminación de translocaciones cromosómicas detectadas en células tratadas convencionalmente con Cas9. Interesantemente, la co-cultivo de 3CAR/7CAR resultó en 'auto-enriquecimiento' produciendo poblaciones 99.6% TCR-/CD3-/CD7-. Las células 3CAR o 7CAR pudieron ejercer citotoxicidad específica contra líneas de leucemia con expresión definida de CD3 y/o CD7, así como células T-ALL primarias. Las células 3CAR/7CAR co-cultivadas exhibieron la mayor citotoxicidad contra objetivos T-ALL CD3 + CD7 + in vitro y en un modelo quimérico humano:murino in vivo. Si bien se informa que los editores de APOBEC pueden mostrar desaminación independiente de guías tanto de ADN como de ARN, no encontramos actividad problemática de 'fuera del objetivo' o conversión de bases promiscua que afecte a las regiones de unión específicas del antígeno CAR, que de otro modo podrían redirigir la especificidad de las células T. La infusión combinada de células T CAR anti-T resistentes al fratricidio puede permitir una remisión molecular mejorada antes del alo-HSCT para malignidades de células T.